一、孢子分離法
蘑菇孢子分離法，是利用成熟子實體的有性擔孢子能自動從子實體層中彈射出來的特征，在無菌條件下和適宜的培養(yǎng)基上，使孢子萌發(fā)成菌絲，獲得純種的一種方法。孢子分離可分為單孢分離和多孢分離法兩種，由于是從有性擔孢子（是指其細胞核已經(jīng)地核配過程）分離純菌絲體，因此生產(chǎn)上多采用多孢分離法來保持菌株的原有特性，而單孢分離法主要應用于菌株的篩選和雜交育種等工作，孢子分離主要分為兩個步驟，首先是采集孢子，其次進行單孢或多孢子分離。
?。ㄒ唬┎杉咦?/div>
1、種菇的選擇 采集孢子首先要選好種菇即分離用的子實體。一般蘑菇種菇要求是第一潮菇，出菇較早，單生，個體健壯，特征典型的子實體，經(jīng)過仔細的觀察篩選后在菇床上做個記號，讓種菇充分生長，直至即將破膜時將菇采摘進行孢子彈射。
2、孢子彈射收集 種菇采收后可浸入0.1%升汞溶液中消毒約一分鐘，用鑷子取出后經(jīng)無菌水沖洗數(shù)次，再用無菌濾紙把表面水吸干，或直接用75% 酒精棉球輕輕控拭菌蓋及菌柄進行表面消毒。隨后用無菌刀切掉多余菌柄（約留下1.5-2cm即可），把菇直立，菇柄朝下插入鋁線制作的支持物上，放入了先準備好鋪有無菌濾紙條的平皿上，蓋上鐘罩（如圖 所示）。這套孢子收集裝置需事先進行高壓滅菌消毒。把裝好子實體的孢子彈射收集器放在溫度為15-20℃的室內(nèi)，經(jīng)24-48小時左右， 可見到無菌濾紙上有褐色的蘑菇孢子印。在無菌操作下把收集到蘑菇孢子的濾紙條裝入無菌的空試管中，并在溫度下進行真空干燥，之后放入冰箱可長期保存?zhèn)溆谩?/div>
?。ǘ╂咦臃蛛x
1、多孢分離法 即把多個孢接種在同一培養(yǎng)基上，讓它們萌發(fā)共同生長交錯在一起，從而獲得純種的一種方法，由于多個孢子間的種性互補，基本上可以保持親本的穩(wěn)定性，此法比較簡易，在過去的蘑菇制種中應用較為普遍。
?。?）斜面劃線法：按無菌操作規(guī)程，用無菌接種環(huán)從收到孢子的濾紙條上沾取少量孢子，在PDA試管斜面培養(yǎng)基上自下而上劃線，劃線時勿用力， 以免劃破培養(yǎng)基表面，接種完畢，抽出接種種灼燒試管口，塞上棉塞，放置24℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待孢子萌發(fā)后（一般約15-20天），挑選萌發(fā)快，長勢旺的菌落， 轉(zhuǎn)接于新試管培養(yǎng)基上再行培養(yǎng)。
?。?）涂布分離法：按無菌操作方法，取一小塊具有孢子的濾紙條，放入裝有無菌水的小三角瓶中，充分搖勻制成孢子懸浮液，然后用已滅菌的試管，吸取孢子懸浮液，滴1-2滴到PDA試管或培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)動試管使孢子懸浮液均勻分布于斜面上，或用玻璃涂布棒將平板上的懸浮液涂布均勻。孢子在培養(yǎng)基上經(jīng)24℃恒溫培養(yǎng)萌發(fā)后，挑選幾株發(fā)育勻稱，生長速度快的菌落，移接于另一試管斜面培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)即為母種。
0 條相關評論
推薦圖文
推薦技術
點擊排行