?。?）器械分離法：應(yīng)用顯微操作器，直接挑選單孢子，移至PDA 平板中進(jìn)行孢子刺激萌發(fā)培養(yǎng)，獲得單孢純種。

　?、冁咦討腋∫褐苽洌和♂尫蛛x法，孢子濃度控制在1000個(gè)/毫升；

　?、谄桨逋坎迹簩⑾♂尯蟮逆咦討腋∫旱?.1毫升于平板上，用無(wú)菌的T氏棒進(jìn)行均勻涂布，每個(gè)平板含孢子大約100個(gè)左右；

　　③鏡檢分離：待涂布均勻的平板瓊脂表面水分干燥后即可于顯微鏡下觀察，當(dāng)在視野中心見(jiàn)到孢子，而視野周?chē)鸁o(wú)其它孢子時(shí)，可用顯微操作器操縱玻璃針把孢子從培養(yǎng)基表面挑取，隨后把孢子轉(zhuǎn)移至PDA平板的表面上，進(jìn)行孢子萌發(fā)培養(yǎng)，孢子萌發(fā)培養(yǎng)須使用蘑菇氣生菌絲刺激培養(yǎng)，才能提高萌發(fā)率，培養(yǎng)的具體操作方法與涂布分離法相同。

　　（4）單孢子菌落接待：當(dāng)孢子經(jīng)過(guò)10天的刺激培養(yǎng)， 肉眼可見(jiàn)到菌絲生長(zhǎng)而成小菌落，應(yīng)及時(shí)用打孢子器把該菌落分離，每天都應(yīng)觀察孢子萌發(fā)情況， 如果不及時(shí)把菌落移接，該菌落會(huì)快速生長(zhǎng)而影響較遲萌發(fā)單孢子的分離。

　　二、組織分離法

　　組織分離法是利用子實(shí)體組織來(lái)分離獲得純菌絲的方法。組織分離系一種無(wú)性繁殖法，雙親的染色體沒(méi)有經(jīng)過(guò)重組，因此組織分離基本上可保持親本的生物不特性，棒操作簡(jiǎn)便，取村廣泛，在過(guò)去傳統(tǒng)的穩(wěn)定菌株中常采用此方法進(jìn)行菌種的分離，退化不明顯，但是隨著蘑菇雜交菌種的應(yīng)用，由于雜種本身所具有的不穩(wěn)定，組織分離常造成菌株的退化，目前生產(chǎn)上很少采用，只是進(jìn)行野生菌株分離時(shí)，才比較常用。其方法如下：

　?、偬暨x種菇：其標(biāo)準(zhǔn)與孢子收集要求相同；

　?、诠襟w消毒：將子實(shí)體菌柄基部切除，置接種箱內(nèi)，用75%酒精對(duì)菇體表面進(jìn)行消毒；

　?、劢M織分離：解剖刀經(jīng)火焰滅菌，在菇柄中部縱切一刀， 用手掰開(kāi)菌再用接種鏟在菇蓋與菇柄交界處切五個(gè)小方塊，隨后挑取一小塊組織，迅速移接到PDA斜面培養(yǎng)基上，置24℃下培養(yǎng)，待組織塊長(zhǎng)出菌絲無(wú)污染即為純種。