【作者】龍云鳳 吳瑩瑩 賈薇 楊海芮 白旭 張勁松 楊焱 張赫男 欒軍 高玲 王毅謙 汪雯翰

【機構】江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心 上海市農業(yè)科學院食用菌研究所農業(yè)部南方食用菌資源利用重點實驗室國家食用菌工程技術研究中心國家食用菌加工技術研發(fā)分中心上海市農業(yè)遺傳育種重點開放實驗 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 石河子大學生命科學學院

【摘要】利用細胞克隆實驗、劃痕實驗和alamarBlueTM細胞活力測定實驗評價樟芝皿培菌絲體醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相對SPCA-1非小細胞肺癌的體外抑制作用,并進一步利用流式細胞術Annexin VFITC（fluorescein isothiocyanate）/PI（propidium iodide）雙染測定細胞早期凋亡率、流式細胞術2′,7′-二氯熒光素二乙酸酯（2′,7′-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA）單染測定ROS（reactive oxygen species）釋放量、流式細胞術PI單染測定細胞周期變化和ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）檢測細胞凋亡相關蛋白Caspase-3、p53和PARP的表達,探討樟芝皿培菌絲體醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相抑制SPCA-1增殖的作用機理。研究結果表明:樟芝皿培菌絲體醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相均能抑制SPCA-1細胞克隆的形成、遷移和增殖,石油醚萃取相的活性明顯好于氯仿萃取相;石油醚萃取相通過促進SPCA-1釋放ROS來誘發(fā)線粒體依賴性早期凋亡的發(fā)生,并使促凋亡蛋白Caspase-3和p53表達上升,同時抑制蛋白PARP表達,從而發(fā)揮其抑制SPCA-1肺癌細胞增殖的作用;而氯仿萃取相主要通過將SPCA-1細胞阻滯在S期抑制其增殖。

【關鍵詞】克隆形成; 遷移; 活性氧; 凋亡; 細胞周期; Caspase-3; p53; PARP;