【作者】歐陽萍蘭 李瓊潔 郭麗瓊 林俊芳 葉志偉 魏韜 鄭倩望 伍土恒 羅潤

【機構】華南農(nóng)業(yè)大學食品學院&食品生物技術研究所 廣東省微生態(tài)制劑工程技術研究中心

摘要：對金針菇(Flammulina velutipes)冷誘導相關的組氨酸激酶基因HK1和HK2構建了基因組編輯(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表達載體,探索了金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對潮霉素的最低敏感濃度,利用PEG介導的方法將表達載體pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA轉(zhuǎn)化金針菇原生質(zhì)體,經(jīng)潮霉素篩選后的擬轉(zhuǎn)化子再進行PCR鑒定。結果顯示:金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對潮霉素的最低敏感濃度均為50μg/mL;經(jīng)潮霉素篩選后的部分擬轉(zhuǎn)化子成功擴增出Cas9的部分片段,攜帶有HK1、HK2基因載體的Cas9蛋白基因成功整合到了金針菇的基因組中,兩個表達載體轉(zhuǎn)化率分別為24.1%和12.5%。 

基金：國家自然科學基金項目(31372116、31572178)； 廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)食用菌體系項目(2016LM1125、2016LM1126)；

關鍵詞：金針菇; CRISPR/Cas9; PEG介導的轉(zhuǎn)化;