【作者】李志勇 劉磊 曹志艷 董立 董志平

【機(jī)構(gòu)】河北省農(nóng)林科學(xué)院谷子研究所河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

【摘要】漆酶是一種含銅的多酚氧化酶,與植物病原菌致病性、黑色素合成及降解木質(zhì)素等方面相關(guān)。為明確漆酶在新月旋孢腔菌的催化作用及其催化活性,以2,2′-連氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(簡(jiǎn)稱ABTS)為底物,利用分光光度計(jì)在420nm下測(cè)定胞內(nèi)漆酶活力,結(jié)果表明酶活測(cè)定最佳反應(yīng)條件為緩沖液pH2.8、Cu2+濃度500μmol/L和0.6mmol/LABTS。根據(jù)漆酶Cu2+結(jié)合保守結(jié)構(gòu)域設(shè)計(jì)了1條引物,對(duì)新月旋孢腔菌漆酶基因進(jìn)行克隆,并通過(guò)RACE技術(shù)克隆了其全長(zhǎng)cDNA序列。開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1,803bp,編碼600個(gè)氨基酸,通過(guò)生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)新月旋孢腔菌漆酶基因與其他植物病原菌漆酶基因具有較高的同源性,新月旋孢腔菌漆酶基因編碼的蛋白含有4個(gè)銅離子結(jié)合位點(diǎn)保守域及8個(gè)潛在N-糖基化位點(diǎn),并且氮端存在信號(hào)肽序列。在新月旋孢腔菌漆酶基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)現(xiàn)1個(gè)金屬響應(yīng)原件(MRE)、1個(gè)壓力響應(yīng)原件(STRE)、2個(gè)CreA結(jié)合位點(diǎn)和4個(gè)氮因子結(jié)合位點(diǎn)。 

【基金】谷子產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(No.CARS-07-12.5-A8)；

【關(guān)鍵詞】新月旋孢腔菌; 胞內(nèi)漆酶活性; 漆酶基因; 基因克隆;