【作者】鄧大綸；田波；陸師義；

【機構】中國科學院微生物研究所；中國科學院微生物研究所 北京 100080；

【摘要】我們用玉米黑粉菌(Ustilago maydis)熱休克基因(Heat shock gene,hsp 70)的啟動子和終止子與新霉素磷酸轉移酶基因相連,構建成了有效的雙功能質粒pDL1(在E。coli中用Amp作為選擇標記,在玉米黑粉菌中用新霉素作為選擇標記)。以分離的一株新霉素敏感的玉米黑粉菌作為受體菌,用構建的pDL1質粒作為供體DNA,對影響受體菌原生質球的形成條件(培養(yǎng)基、菌齡、各種酶、酶的濃度、作用時間和滲透壓穩(wěn)定劑)、再生條件和DNA轉化條件進行了初步研究。對數(shù)前中期收集的菌體,以5mg/ml真菌溶壁酶處理30分鐘左右,90%都形成原生質球,其再生率為60—80%,轉化率為300—1000轉化子/μg DNA。隨機選出25個轉化子,DNA雜交都為陽性。分析dot-blot和Southern blot DNA雜交結果,發(fā)現(xiàn)質粒在細胞中以整合形式存在,一個細胞可以有多拷貝的整合質粒,質粒可能以非完全同源性的重組形式,參入性地整合進染色體中。    

【關鍵詞】玉米黑粉菌；DNA載體的構建；原生質球轉化和再生；