菌種生產流程，一般涵蓋母種、原種和栽培種三個層次，這也就是我們常說的一級、二級、三級菌種。在這三個層次中，母種的分離與選育需要較高的技術性和精細化要求，而原種與栽培種的制作則相對簡化。接下來，我們將逐一探討各級菌種的制作技術。

一、母種的分離與選育

母種是菌種生產流程中的關鍵環(huán)節(jié)，其分離與選育主要依賴人工選擇、誘變育種、雜交育種以及原生質融合等技術。對于大多數(shù)制種專業(yè)戶來說，人工選擇是一種簡單而實用的方法。具體來說，就是通過觀察菌落的形態(tài)、色澤等特征，挑選出符合要求的菌株進行分離與培育。接下來，我們將詳細介紹人工選擇的具體步驟與操作方法。

1、種源采集

從野生成或人工栽培的群體中，精心挑選出具有代表性的優(yōu)良菇體，作為種源。挑選標準包括：菇體成熟度適中，朵形圓正，肉質肥厚，且無病蟲害。采集1-2朵符合這些標準的種菇，并編上號碼，作為分離母種的材料。若從栽培室采集，則應標明原菌株的代號。

2、培養(yǎng)基配制

采用瓊脂培養(yǎng)基，又稱PDA培養(yǎng)基。其常用配方為：馬鈴薯200-250克，瓊脂15-20克，葡萄糖20-25克，清水1000毫升。此外，還可以加入硫酸鎂1-1.5克，維生素B1微量，以及磷酸二氫鉀2-3克以增強培養(yǎng)基的營養(yǎng)。制作過程中，需先將馬鈴薯洗凈去皮后切成薄片，煮沸30分鐘并過濾取汁。接著加入瓊脂并攪拌至充分溶化，再加入葡萄糖等其他成分，過濾后裝入玻璃試管或三角瓶內，進行高壓滅菌。滅菌完成后，趁熱將試管斜排或三角瓶內的培養(yǎng)基冷卻，即成為固體斜面培養(yǎng)基。

3、母種分離方法

有孢子彈射、組織分離和基內分離三種方法可供選擇。(1)孢子彈射法。種菇經表面消毒并吸干水分后，可將其懸掛于裝有瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶內，讓孢子自然散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲?；蛘呒羧∫恍K菇體貼附在試管斜面培養(yǎng)基上，讓孢子散落并萌發(fā)菌絲，從而獲得母種。(2)組織分離法。種菇經消毒后，在接種箱內用手或刀片從菇柄處對半解開，取一小塊菇體縱切成5毫米x10毫米的小薄片，用接種針挑取一塊接入斜面培養(yǎng)基中央，待其萌發(fā)菌絲后即可得到母種。(3)基內分離法。選擇已長菇的木段，經酒精和升汞水消毒后，將小薄片劈成0.5-1厘米寬的小條接入斜面培養(yǎng)基中央?；蛘邚囊验L菇的菌袋中鉤取色澤純、長勢旺的菌絲體接入試管斜面培養(yǎng)基中央，待其萌發(fā)菌絲后同樣可獲得母種。

4、適溫培養(yǎng)

將通過不同方式分離得到的菌種接種于試管后，需及時移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室，并將溫度控制在約25℃，以利于孢子或菌絲的發(fā)育。一般情況下，孢子彈射后約3至4天，孢子會開始萌發(fā)成菌落，而10天后菌絲即可長滿試管。對于組織分離，接種后2至3天菌絲便會開始萌發(fā)，并在培養(yǎng)基上逐漸蔓延。菇木分離接種后，菌絲的恢復生長則需要大約7天的時間。

5、選育提純

經過上述培養(yǎng)得到的菌絲，并非全部都是優(yōu)質菌絲。因此，在菌絲萌發(fā)并開始生長后，需要仔細觀察，挑選出色澤純正、健壯且長勢良好的菌絲。在接種箱內，將這些優(yōu)選的菌絲連同培養(yǎng)基一同鉤取，并接入到另外準備好的試管培養(yǎng)基中。在恒溫23至25℃的條件下繼續(xù)培養(yǎng)7至10天，待菌絲再次長滿試管后，進行再次觀察和擇優(yōu)選取，即可得到“母代”母種。

6、轉管擴接

“母代”母種可以進一步轉管擴接成“子代”母種。這個過程需要使用相同的斜面培養(yǎng)基，并且每支母代母種可以擴接出30至50支子代母種。在生產過程中，通常供應的是子代母種，它還可以進行再次轉管擴接。但需要注意的是，每次轉管擴接的數(shù)量應控制在20至25支，并且整個轉管過程不得超過5次。

7、出菇試驗

經過分離選育得到的母種，還需要進行出菇試驗來驗證其是否可用于實際生產。試驗方法是將母種接種到瓶裝或袋裝的木屑培養(yǎng)基上，并根據(jù)不同菇耳種性的溫度要求進行適溫培養(yǎng)。只有當菇耳成功出菇時，才能證明該母種真正適合用于生產。

接下來，我們進入原種繁殖培養(yǎng)的部分。將經過選育的母種接種到瓶裝或袋裝的木屑培養(yǎng)基上，并通過適當?shù)呐囵B(yǎng)條件，即可成功繁殖出原種。在繁殖過程中，需要嚴格控制技術要求，以確保繁殖出的原種具有優(yōu)良的品質和適應性。

1、原種木屑培養(yǎng)基的制備

選用雜木屑作為主要成分，占比77.5%，再加入麥麩20%，蔗糖1%，石膏粉1.2%以及硫酸鎂0.3%。在滅菌前的pH值應控制在6.5至7的范圍內，同時調整含水量至60%。將上述原料充分混合后，裝入750毫升的玻璃菌種瓶中，注意裝料時下松上緊的原則。瓶口用棉花塞緊，并用牛皮紙包裹住瓶頸與棉塞，以防止污染。隨后，將培養(yǎng)基放入高壓滅菌鍋中，在147千帕/平方厘米的壓力下滅菌2至2.5小時?；蛘?，也可以選擇常壓滅菌方式，在100℃下保持10至11小時，滅菌完成后趁熱取出，讓其自然冷卻。

2、菌種接入

當料溫降至25℃以下時，在無菌條件下，將試管種分割成若干份，通過酒精燈火焰的短暫灼燒后，迅速接入原種培養(yǎng)基上。每支母種可接入4至6瓶原種。

3、發(fā)菌培養(yǎng)

接種后的玻璃菌種瓶需立即移入25℃的菌種培養(yǎng)室中，并保持空間相對濕度在70%以上，同時避免強光直射。不同菇類所需的培養(yǎng)時間有所不同，一般菇類需要40至50天的培養(yǎng)周期，而草菇和銀耳則只需15至20天。

4、去雜選優(yōu)

在原種培育過程中，需每天進行細致觀察。一旦發(fā)現(xiàn)雜菌污染的跡象，應立即將受污染的原種淘汰，以確保培養(yǎng)的質量。

二、栽培種擴大培育

將原種進一步擴接至相同的木屑培養(yǎng)基上，經過適溫條件下的30至35天培養(yǎng)，即可獲得栽培種，這種栽培種可直接用于生產栽培。在栽培種的生產過程中，我們通常選用750毫升的菌種專用瓶，但考慮到使用量較大，聚丙烯菌種袋（規(guī)格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等）則更為常用，選擇時需依據(jù)各種菇耳的特性和當?shù)氐牧晳T。

培養(yǎng)基的滅菌工作至關重要，我們采用常壓滅菌灶，確保滅菌溫度達到100℃，并持續(xù)8至10小時。滅菌完成后，應趁熱卸袋并讓其自然冷卻。當料溫降至25℃以下后，便可在無菌環(huán)境下接入選定品種的原種。每瓶原種能夠擴接成50至60瓶栽培種。

在菌種培育室中，我們需要保持環(huán)境干凈、避免強光直射，并將室溫控制在23至25℃的范圍內。培育過程中應定期檢查，一旦發(fā)現(xiàn)雜菌污染，需立即淘汰，以確保菌種的優(yōu)質。當菌絲充滿菌種袋，且尖端菌絲出現(xiàn)上爬現(xiàn)象時，便意味著栽培種已達到適齡狀態(tài)。